免疫熒光實驗是根據抗原抗體反應的原理，先將已知的抗原或抗體標記上熒光素制成熒光標記物，再用這種熒光抗體（或抗原）作為分子探針檢查細胞或組織內的相應抗原（或抗體）。在細胞或組織中形成的抗原抗體復合物上含有熒光素，利用熒光顯微鏡觀察標本，熒光素受激發光的照射而發出明亮的熒光（黃綠色或桔紅色），可以看見熒光所在的細胞或組織，從而確定抗原或抗體的性質、定位，以及利用定量技術測定含量。
免疫熒光實驗技術又稱熒光抗體技術，是標記免疫技術中發展最早的一種。它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術。很早以來就有一些學者試圖將抗體分子與一些示蹤物質結合，利用抗原抗體反應進行組織或細胞內抗原物質的定位。
1、取出培養有細胞的蓋玻片或glass-bottom培養皿，用0.01MPBS洗2-3遍。
2、加入0.3%的Tritonx-100,37℃,30rain
3、加入4%多聚甲醛試問固定30min或冷丙酮4℃固定10min。
4、正常阻斷血清1:20封閉試問20-30min，抑制IgG的非特異性結合。阻斷血清選擇與二抗同一種屬的正常血清。
5、去掉正常血清，直接加入一抗，37℃孵育1h或4℃過夜。抗體以0.01mo/LPBS稀釋(理想的抗體濃度需經試驗而定)。
6、0.3%TritonX-100洗5min，0.01mol/IPBS洗5min，0.3%TritonX5min，0.01MPBS洗5rain。
7、加入FITC-二抗或TRITC-二抗，37℃，孵育1h。
8、0.3%TritonX-100洗5rain，0.01mol/LPBS洗5min，0.3%TritonX5min，0.01mol/LPBS洗5min，用濾紙吸干。
9、90%甘油(PBS配制)封片。
10、激光掃描共焦顯微鏡下觀察，或于4℃避光保存。
