新生大鼠皮層來源的小膠質(zhì)細胞分離和培養(yǎng)

小膠質(zhì)細胞大約占哺乳動物大腦細胞總數(shù)的12%，通過吞噬腦組織中的碎片和病原體來維持腦實質(zhì)的穩(wěn)態(tài)，在正常的腦生理學中發(fā)揮著重要作用。

一、解剖新生大鼠腦組織

1. 用溫熱的生理鹽水擦拭P2天的新生鼠；

2. 用70%乙醇沖洗P2新生鼠；

3. 從頭部取出整個大腦，放入裝有L-15溶液的培養(yǎng)皿中；

4. 移除腦膜，轉(zhuǎn)移皮層到裝有L-15溶液的培養(yǎng)皿中。

二、制備混合膠質(zhì)細胞群

1. 清洗所有P2新生鼠的大腦皮層；

2. 把大腦皮層剪成小塊；

3. 加入新鮮的DMEMwan全培養(yǎng)基4-5ml，吹打10-15次；

4. 用100um的濾器過濾；

5. 離心2500RCF/5min/4℃。

三、種植混合膠質(zhì)細胞群

1. 一個P2新生鼠的大腦皮層混合細胞群種到一個T-75培養(yǎng)瓶中；

2. 第5天，全量換液，之后每3天全量換液。

四、原代小膠質(zhì)細胞的分離和培養(yǎng)

1. 2-3周，當混合的細胞群長滿T-75培養(yǎng)瓶底；

2. 在37℃以150rps的速度搖動T-75培養(yǎng)瓶2小時;

3. 用移液管從所有T-75培養(yǎng)瓶中收集培養(yǎng)基，不要破壞培養(yǎng)瓶表面的星形膠質(zhì)細胞層；

4. 離心2500RCF/5min/4℃；

5. 吸取上清液，將沉淀重懸于1 ml小膠質(zhì)細胞培養(yǎng)基中；

6. 計數(shù)；

7. 種植小膠質(zhì)細胞。

8. 在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

五、代表性結果